Reagensi za kondenzaciju peptida

Trenutno, u sintezi peptida, metode karboksilne aktivacije se uglavnom koriste za završetak peptidnih reakcija. Najranije korištene metode bile su aktiviranje aminokiselina u kiselinske kloride, azide, simetrične anhidride i miješane anhidride kiselina. Međutim, zbog postojanja racemizacije aminokiselina u ovim uslovima, opasnosti od reakcijskih reagensa i složenosti pripreme, oni su postepeno zamijenjeni kasnijim kondenzacijskim reagensima, koji se prema strukturi mogu podijeliti u dvije vrste.: Glavni kondenzacijski reagensi su: Karbodiimid tip, tip soli onijum (Uronijum).

Uglavnom uključuju: DCC, DIC, EDC.HCl čekati. koristiti DCC izvršiti reakciju, zbog DCU, postoji DMF. Ima vrlo malu rastvorljivost i proizvodi bijeli talog, tako da se generalno ne koristi u sintezi čvrste-faze. Međutim, budući da je jeftin, može se ukloniti filtracijom u sintezi tečne{4}}faze i još uvijek se široko koristi. EDC.HCl Zbog svoje rastvorljivosti u vodi često se koristi u povezivanju polipeptida i proteina, a takođe je prilično uspešan. Međutim, jedan od najvećih nedostataka ovog tipa kondenzacijskog reagensa je taj što će se, ako se koristi sam, pojaviti više nuspojava. Međutim, istraživanja pokazuju da ako se dodaju tokom procesa aktivacije HOBt, HOAt, takvi reagensi mogu kontrolirati nuspojave u vrlo niskom rasponu. Mehanizam reakcije je sljedeći:

Slika 2 Mehanizam reakcije aktivacije DIC-a

Kondenzacijski reagensi tipa onijumove soli imaju visoku reaktivnost i veliku brzinu, a sada se široko koriste, uglavnom uključujući: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP čekanje. Tokom upotrebe ovog reagensa potrebno je dodati organsku bazu, kao što je diizopropiletilamin (DIEA), N- metilmorfolin (NMM). Aminokiselina se može aktivirati tek nakon dodavanja ovog reagensa. Mehanizam reakcije je sljedeći:

Smole koje se koriste u sintezi peptida u čvrstoj-fazi su uglavnom polistiren-divinilbenzenski materijali, sa veličinama u rasponu od 75 do 150 μm, stepen unakrsnog-povezivanja je između 1-2%, a većina onih koji se sada koriste su 1%, jer na ovom stepenu ukrštanja ima dobru vezu, DCM{8} svojstva i ima trodimenzionalnu strukturu mreže, a molekuli reaktanata mogu se slobodno kretati unutar smole. Najkritičniji dio smole je spojna ruka, koja je na jednom kraju povezana sa smolom, a na drugom služi kao mjesto reakcije. Smole koje se trenutno široko koriste su: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA čekaj. u PAM-u, MBHA se koristi u BOC strategiji, jer je vrlo stabilan na kiselinu, mora biti HF, TFMSA Može se rezati samo u uslovima jake kiseline.

Nakon što je završena sinteza peptida u čvrstoj-fazi, mora se odabrati odgovarajući reagens za cijepanje da bi se peptid odcijepio od smole, a zatim precipitirao glacijalnim etrom, prikupio talog centrifugiranjem i HPLC odvojio, prečistio i osušio{1}}peptidni proizvod da se dobije konačni peptid.

Zbog različitih odabranih smola i sekvenci aminokiselina, metode cijepanja odabrane tokom cijepanja nisu potpuno iste. Općenito, uslovi cijepanja se biraju u kiselim uvjetima. Za PAM, MBHA smolu, koja se obično koristi HF Cutting, p-krezol, p-merkaptofenol, anisol i drugi reagensi moraju se dodati tokom procesa rezanja. A za Wang, Rink-Amid, Trt Resin, koji se uglavnom koriste za rezanje TFA, dodajte etilen glikol, anisol sulfid, vodu, triizopropilsilan, fenol, itd. tokom procesa rezanja.

Ovi aditivni reagensi se uglavnom koriste kao reagensi za hvatanje karbokationa. Svrha je uhvatiti karbokation koji nastaje tokom reakcije cijepanja i smanjiti nuspojave uzrokovane napadom ovih karbokation jona na neke bočne lance aminokiselina. Amino kiseline za koje postoji veća vjerovatnoća da će izazvati nuspojave uključuju: Trp, Tyr. Doziranje reagensa za rezanje je uglavnom 10-15 ml/g smole.

Uobičajeni omjeri rezanja: HF/p-krezol/p-tiokrezol (90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), Reakcija se obično izvodi na sobnoj temperaturi 2 h-4 h.

In solid-phase peptide synthesis, we often encounter the problem of peptide synthesis failure or low synthesis efficiency. The main reason is due to the peptide sequence, because some peptide sequences are formed on the resin. -Folding changes the swelling properties of the resin, and may also bury the active sites of the reaction in the resin, making it difficult for the reaction to proceed. Current reports indicate that

Koristite pomešane rastvarače, DMSO/DMF, 6N rastvor gvanidina/DMF

Povećajte temperaturu reakcije ili koristite mikrovalnu metodu

Koristite haotropne soli, LiCl, NaClO4 sačekajte.

Koristite one sa boljim svojstvima bubrenja PEG-PS smole, uz smanjenje opterećenja smole (0,05-0,2 mmol/g)

​